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作育基
产品说明
乳腺上皮细胞完全作育基是一种增进人乳腺原代上皮细胞体外生长的作育基。该产品是一种无菌的液体混淆系统，，含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。作育基基于碳酸氢盐的缓冲系统，，在5% CO2/95%空气的作育箱中平衡时，，pH值为7.4。该作育基的配方可以提供一个合适的营养情形，，选择性地增进体外人乳腺原代上皮细胞的生长和扩增。
使用说明
4℃避光生涯1个月内有用。
1.乳腺癌原代细胞作育
接纳预冷的DMEM/F-12作育基将细胞外基质胶(Corning#356231)按1：：：50比例稀释，，至少提前30 min将稀释后的基质胶预铺在作育瓶/板底部外貌，，并使其完全笼罩底部外貌，，30~60 min后吸干备用。将疏散并计数后的细胞悬液接种于作育瓶/板，，补加完全作育基至所需体积，，轻轻摇晃混匀，，外貌消毒后置于作育箱，，37 ℃ 、5 % CO2条件下举行作育；；；原代细胞首次接种后2-3 天内勿动(利于细胞贴壁)。
2.原代乳腺上皮细胞传代
镜下视察细胞形成克隆，，且汇合度达80~90%时即可传代。作育箱中取出细胞，，弃去旧作育液，，加入适量TrypLE™ Express酶(Gibco#12605010)37℃孵育，，10~20 min后取出，，轻拍作育瓶/板侧面，，显微镜下视察细胞消化情形。细胞消化至细胞变圆并最先脱落时用含10%胎牛血清的DMEM作育基终止消化，，并将细胞转移至离心管中，，室温，，300 g，，离心5 min；；；弃上清，，以1-2 mL完全作育基重悬细胞，，活细胞计数，，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于预铺有基质胶的作育瓶/板底部，，预铺要领同方法1。补加完全作育基至所需体积，，轻轻摇晃混匀，，外貌消毒后置于作育箱，，37 ℃ 、5 % CO2条件下继续作育。
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