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作育基
产品说明
食管癌类器官作育基是一种为增进食管鳞癌类器官体形状成和扩增而设计的作育基。它是一种无菌的液体混淆系统，，，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该作育基的奇异配方可以提供一个合适的食管鳞癌类器官扩增所需营养情形，，，选择性地增进体外人食管鳞癌类器官的生长。
使用说明
4℃避光生涯2个月内有用。
1. 食管癌类器官作育
将消化好的食管癌细胞悬液计数，，，凭证1-2万细胞每孔盘算所需的细胞数，，，凭证盘算好的体积吸收细胞悬液加入预冷的1.5 mL离心管中，，，补齐预冷的DF12至所需体积，，，将预冷后的细胞悬液加入等体积的Matrigel基质胶(Corning)中轻轻混匀(全程冰上操作)，，，然后将细胞与基质胶的混淆液凭证40 μL/孔接种于24孔板。将接种好的作育板放入作育箱至少30 min，，，待Matrigel完全凝固，，，然后沿24孔壁每孔缓慢加入500 μL预先恢复至室温的类器官作育基，，，3天后镜下视察类器官形成情形，，，粒径大于50 μm即以为类器官已经形成，，，每5天替换一次作育基举行作育，，，持续视察类器官巨细，，，镜下视察大部分类器官巨细均大于50 μm且巨细不再增大即可网络类器官举行后续实验。
2. 食管癌类器官网络
弃作育基，，，每孔加入500 μL预冷DF12，，，重复奏乐至基质胶完全脱离板底，，，网络至15 mL离心管中，，，1500 rpm离心5 min，，，轻轻吸去上清和基质胶层，，，待用。
3. 食管癌类器官传代
网络的类器官，，，加入3-5 mL类器官解离试剂（PRS-ODR），，，37℃，，，200 rpm水平摇床振荡消化（详细时间凭证类器官巨细和数目决议，，，以肉眼可见颗粒显着减小一半为准，，，可中心作废化的类器官显微镜视察，，，类器官消化至包括有3~10个细胞的细胞团块最佳）；；消化完全后接纳等体积的含10% FBS的DMEM作育基终止消化。1500 rpm离心3 min，，，弃上清，，，使用洗濯液重悬沉淀后1500 rpm再次离心3 min；；加入预冷的胃癌类器官作育基举行重悬，，，计数，，，凭证作育方法操作继续作育。
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